|
|
مجله دانشگاه علوم پزشکی بابل، جلد ۱۹، شماره ۹، صفحات ۳۹-۴۴
|
|
|
| عنوان فارسی |
ایمنی زائی نانوذرات PLGAواجد پروتئین نوترکیب CfaB از اشریشیا کولی انتروتوکسیژنیک |
|
| چکیده فارسی مقاله |
سابقه و هدف: باکتری اشریشیا کولی انتروتوکسیژنیک، از عوامل شایع اسهال می باشد. با بروز مقاومت آنتی بیوتیکی، ساخت ایمنوژن موثر علیه باکتری ضروری است. فاکتورهای کلونیزاسیون از مهمترین کاندیدای واکسن علیه ETEC می باشند. بارگذاری ایمنوژن های نوترکیب از جمله فاکتورهای کلونیزاسیون در نانو حاملها، سبب محافظت آنها در برابر عوامل محیطی شده، غلظتهای مناسب از ایمونوژن را فراهم و فعالیت زیستی را افزایش می دهد. هدف از این تحقیق بررسی ایمنی زائی پروتئین CfaB بارگذاری شده در نانوذرات PLGA می باشد. مواد و روشها: در این مطالعه تجربی، بهینه سازی کدونی ژن cfaB با نرم افزار OPTIMIZER انجام شد. بیان پروتئین در E.coli با IPTG القا گردید. پروتئین به روش کروماتوگرافی میل ترکیبی تخلیص و با وسترن بلاتینگ ارزیابی شد. نانوذراتPLGA به روش امولسیون دوگانه تهیه و خصوصیات ساختاری با SEM و DLS بررسی گردید. ایمن سازی 40 موش BALB/C در چهار گروه 10 تایی انجام شد و به گروه اول 20 میکروگرم از پروتئین بارگذاری شده در نانوذره، گروه دوم پروتئین به همراه ادجوانت فروند و گروه سوم و چهارم به ترتیب نانوذرات بدون آنتی ژن و بافر PBS تجزیه شد. تزریقات با فاصله دو هفته ای و چهار بار انجام شد و یک هفته پس از تزریقات خونگیری از چشم حیوانات انجام شد و تیتر آنتی بادی با روش الایزا تعیین گردید. ممانعت سرم از اتصال باکتری ETEC به سلول Caco2 بررسی شد. یافته ها: ژن بهینه سازی شده شاخص سازگاری کدون 0/85 را دارا شد. بیان پروتئین منجر به تولید CfaB با وزن 18/9 کیلودالتون شد. میزان پروتئین 5 میلی گرم در لیتر بود. ظرفیت بارگذاری پروتئین در نانوذرات PLGA، 85 درصد بود. متوسط اندازه نانوذرات 170 نانومتر بود. ایمن سازی موشها پاسخ آنتی بادی سرمی را القا کرد. سرم ایمن اتصال ETEC به سلول Caco2 را 62/8% کاهش داد. نتیجه گیری: نتایج مطالعه نشان داد که پروتئین نوترکیب CfaBبارگذاری شده در نانوذرات PLGA ایمنی علیه باکتری ETECرا تحریک می کند. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
PLGA، نانوذرات، ETEC، CfaB، ایمنی زائی. |
|
| عنوان انگلیسی |
Immunogenicity Evaluation of PLGA Nanoparticles Contains Recombinant CfaB Protein from Enterotoxigenic Escherichia Coli |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
BACKGROUND AND OBJECTIVE: Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) are the most common causes of diarrhea among children. Colonization factors (CFs) are the major ETEC candidate vaccines. Considering the high antibiotics resistance reports, construction of effective immunogen against bacteria is major goal. Encapsulation of recombinant immunogen in nano carriers such as polymeric PLGA nanparticles, not only protects them from degradation in environmental elements but also provides the effective concentrations of immunogen in targets, hence increasing bioactivity. The aim of this study was to investigate the immunogenic properties of CfaB protein encapsulated in PLGA nanoparticles. METHODS: In this research study, cfaB gene codon optimaztion was performed by OPTIMIZER software. Expression of recombinant protein in E.coli was induced with IPTG. The recombinant protein was purified using affinity chromatography and evaluated by Western Blotting analysis. PLGA nanoparticles containing recombinant protein were prepared by double emulsion method and their structures were characterized by SEM and DLS. 40 BALB/C mice in four group were immunized with nanoparticles and antibody titers were determined by ELISA. The efficiency of antibodies in preventing the attachment of ETEC bacteria to the Caco 2 cells was examined. FINDINGS: The optimized gene had a Codon adaptation index (CAI) of 0.85. Expression of recombinant protein led to the production of CfaB with molecular weight of 18/9 kDa. Yield of protein was 5mg/L. Encapsulation efficiency of recombinant protein in PLGA nanoparticles was 85٪. The average particle size was 170 nm. Immunization of mice induced serum antibody response. Immunized sera decreased %62.8 of ETEC adhesion to Caco2 cells. CONCLUSION: Recombinant CfaB protein encapsulated in PLGA nanoparticles stimulate immunity against ETEC. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
PLGA, nanoparticle, ETEC, CfaB, Immunization |
|
| نویسندگان مقاله |
شهرام نظریان | sh nazarian
تهران، اتوبان بابایی، دانشگاه جامع امام حسین ع ،مرکز علم و فناوری زیست،
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)
لطیف موسوی گرگری | l mousavi gargari
تهران،روبروی حرم مطهر امام،دانشگاه شاهد،دانشکده علوم پایه،گروه زیست شناسی
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه شاهد (Shahed university)
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://jbums.org/browse.php?a_code=A-10-2963-2&slc_lang=fa&sid=fa |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/95/article-95-448281.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
میکروبیولوژی |
| نوع مقاله منتشر شده |
تحقیقی |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|