|
|
مجله دانشگاه علوم پزشکی بابل، جلد ۱۹، شماره ۸، صفحات ۵۸-۶۴
|
|
|
| عنوان فارسی |
تولید انگلهای نوترکیب لیشمانیا تروپیکا بیان کننده دو پروتئین گزارشگرEGFP و لوسیفراز |
|
| چکیده فارسی مقاله |
سابقه و هدف: انگل لیشمانیا تروپیکا عامل بروز لیشمانیوز پوستی و احشایی در ایران است. بعلت فقدان یک آزمون دقیق، حساس و غیرتهاجمی در مدل حیوانی، درمان و واکسیناسیون برعلیه آن با چالش بزرگی همراه است. لذا در این مطالعه، لیشمانیا تروپیکا با دو ژن گزارشگر پروتئین فلورسنت سبز (egfp) و لوسیفراز (luc) به شکل اتصال یافته (egfp-luc) ترانسفکت شد تا در مطالعات آتی بعنوان یک ابزار تشخیصی سریع و دقیق برای ردیابی و اندازه گیری میزان عفونت در بدن حیوان زنده مورد استفاده قرار گیرد. مواد و روشها: در این مطالعه آزمایشی-تجربی، سازه ژنی حاوی ژنهای egfp-luc از طریق نوترکیبی مشابه در ژنوم سویه ایرانی انگل لیشمانیا تروپیکا (در لوکوس 18srRNA) درج شد. برای غربالگری انگلهای ترانسفکت شده، از شاخص انتخابی G418 استفاده گردید. سپس بوسیله PCR با پرایمرهای مختلف ژنوتیپ انگلها بررسی شد. همچنین با استفاده از وسترن بلات، میکروسکوپ فلورسنت و فلوسایتومتری بیان پروتئینهای گزارشگر ارزیابی شد. یافته ها: مشاهدات اولیه فنوتیپی انگل با استفاده از میکروسکوپ فلورسنت نشان داد که انگلهای نوترکیب L. tropicaEGFP-LUC پروتئین EGFP را در سیتوپلاسم تولید کرده اند. میزان کمی شدت فلورسنت اندازه گیری شده در انگلهای نوترکیب با استفاده از فلوسایتومتری بیش از 90% بود. نتایج آزمونهای PCR ورود ژنها را بدرون ژنوم و لوکوس مربوطه و وسترن بلات بیان هر دو ژن را در شکل پروماستیگوت انگل نشان دادند. نتیجه گیری: این اولین گزارش مبنی بر تولید انگلهای نوترکیب لیشمانیا تروپیکا بیان کننده هر دو ژن گزارشگرegfp و luc بطور همزمان است. |
|
| کلیدواژههای فارسی مقاله |
|
|
| عنوان انگلیسی |
Production of Recombinant Leishmania Tropica Parasites Expressing Two Proteins of Egfp and Luciferase Reporter |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
BACKGROUND AND OBJECTIVE: Generation of recombinant Leishmania tropica (L. tropica) expressing two reporter proteins EGFP and LUC Introduction: L. tropica is the major cause of cutaneous and visceral leishmaniasis in Iran. Due to lack of an accurate, sensitive and noninvasive detection test in animal model is a major problem. Here, we designed L. tropica stably transfected with two reporter genes as fused form, enhanced green fluorescent protein (egfp) and Luciferase (luc), named as egfp-luc to use as a specific tools for detection and measurement of parasite load in live animals. METHODS: In an experimental study, linearized cassette containing egfp-luc genes was stably integrated into Iranian strain of wild-type L. tropica genome, 18srRNA locus, by homologous recombination. Transfectants were screened by G418 resistance, confirmed by PCR and western blotting and the expression of EGFP signals were observed by fluorescent microscope and flow cytometry. FINDINGS: Phenotype observations (by fluorescent microscopy and flow cytometry) were shown that recombinant L. tropicaEGFP-LUC was successfully produced EGFP protein into cytoplasm. Quantification of EGFP intensity was more than 90%. Furthermore, the results of PCR and western blotting verified the proper integration into genome and expression of both genes in promastigotes. CONCLUSION: This is the first report to show the generation of recombinant L. tropicaEGFP-LUC expressing two reporter genes simultaneously. |
|
| کلیدواژههای انگلیسی مقاله |
|
|
| نویسندگان مقاله |
طاهره طاهری | t taheri
خیابان انقلاب، خیابان 12 فروردین، پلاک 69، انستیتو پاستور ایران 69
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)
مهدیه اسکندر | m eskandar
خیابان انقلاب، خیابان 12 فروردین، پلاک 69، انستیتو پاستور ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)
سیما رافتی | s rafati
خیابان انقلاب، خیابان 12 فروردین، پلاک 69، انستیتو پاستور ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://jbums.org/browse.php?a_code=A-10-3111-1&slc_lang=fa&sid=fa |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/95/article-95-448292.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
انگل شناسی |
| نوع مقاله منتشر شده |
تحقیقی |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|