|
|
مجله دانشگاه علوم پزشکی بابل، جلد ۱۹، شماره ۲، صفحات ۲۰-۲۵
|
|
|
| عنوان فارسی |
کلونینگ و بیان فرم جهش یافته و غیرفعال توکسین بوردتلا پرتوسیس سویه بومی ایران |
|
| چکیده فارسی مقاله |
سابقه و هدف: سیاه سرفه بیماری حاد و مسری دستگاه تنفسی به ویژه در نوزادان و کودکان و یکی از ده عامل عمده مرگ ناشی از بیماری های عفونی است. علیرغم کاهش ابتلا به دلیل واکسیناسیون با باکتری کشته شده عامل بیماریزا (Bordetella pertussis)، افزایش بیماری در دهه اخیر بیانگر باز پدیدی ناشی از تنوع ژنتیکی باکتری و ناکارمدی واکسن های کنونی است. بنابراین طراحی واکسنهای جدید و موثر بر پایه سویه های شایع هر جمعیت امری ضروری است. در این مطالعه پروتئین نوترکیب عیر فعال مهمترین آنتی ژن باکتریایی (توکسین پرتوسیس،PTX) سویه شایع بیماریزا در ایران بر پایه نسل جدید واکسنهای غیر سلولی تولید شد. مواد و روشها: سویه باکتری مورد استفاده در این مطالعه جهت استخراج ژنوم و تکثیر ژن، از بین سویه های بیماریزای جدا شده از بیماران ایرانی از آزمایشگاه مرجع سیاه سرفه بخش میکروب شناسی انستیتو پاستور ایران انتخاب شده است. پس از کشت باکتری و استخراج DNA ژنومیک، قطعه ptx-s1 (ناحیه فعال آنزیمیPTX) تکثیر و در 18pUC کلون و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، جهش زایی هدفمند آرژنین 9 به لیزین و گلوتامیک اسید 129 به گلیسین انجام و با تعیین توالی ارزیابی شد. قطعه جهش یافته در سیستم –E.coli BL21 pET15b و جایگاههای BamHΙ/NdeIبا 5/0 mM IPTG القا و بیان شد. سپس توسطSDS-PAGE و ایمونوبلات ارزیابی شد. خالص سازی با کروماتوگرافی تمایلی انجام و غلظت پروتئین مشخص شد.. یافتهها: جهش های Glu129Lys, Arg9Gly با تعیین توالی تایید شد. وجود باند28kDa در ژل و ایمونوبلات با استفاده از آنتی بادیAnti-His بیان پروتئین تایید کرد. پروتئین به مقدارmg/ml 0/36 خالص سازی شد. نتیجه گیری: بر اساس نتایج این مطالعه فرم غیر فعال و ایمونوژن PTX سویه غالب بیماریزا در ایران می تواند به تنهایی و یا در ترکیبی با سایر آنتی ژنها جهت طراحی واکسن های بدون سلولی مورد استفاده قرارگیرد نتی |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
بوردتلا پرتوسیس، توکسین، واکسن غیر سلولی، جهش زایی هدفمند |
|
| عنوان انگلیسی |
Cloning and Expression of Mutant and Inactive Form of Bordetella Pertussis Toxin from Iranian Native Strain |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
BACKGROUND AND OBJECTIVE: Whooping cough is an acute contagious human respiratory disease especially in infants and children and is one of the ten major causes of death from infectious diseases. Despite reducing the risk due to vaccination with killed bacteria pathogen (Bordetella pertussis), increased disease emerged in recent decades indicates re-emerging due caused by genetic diversity of bacteria and the insufficiency of current vaccines. Therefore, the design of new and effective vaccines based on common strains of the population is essential. In this study the prevalent strain Iranian B.pertussis strains has been selected for gene amplification of pertussis toxin (PTX), the most important antigen of bacteria. The toxicity of the PTX related to its enzymatic activity therefore by site directed mutagenesis, the effective residues in the active site of the enzyme has been changed and the inactive and safe recombinant was produced. METHODS: Bacterial strain used in this study to determine the genome and gene amplification was selected from pathogenic strains isolated from Iranian patients from the pertussis reference laboratory of Microbiology of the Pasteur Institute of Iran. Genomic DNA was extracted by kit, ptx- s1(the enzymatic fragment of PTX) fragments amplified and inserted in pUC18. Site directed mutagenic primers were used for substitution of Arg 9 by Lys and Glu129 by Gly. The confirmed mutant ptx- s1 (mptx-s1) was sub-cloned into expression vector pET15b. The expression of recombinant protein in E.coli BL21 was induced by 0.5mM IPTG. The expression was analyzed by SDS-PAGE and immuno-blotting. The protein was puifird by Ni-NTA affinity chromatography under denature condition. FINDINGS: Sequencing data and restriction enzyme analysis confirmed the gene constructing and mutations. The presence of a 28 kDa band in SDS-PAGE and immunoblot showed the expression of mutant PTX. The concentration of recombinant protein was 0.36 mg/ml. CONCLUSION: The Recombinant protein which was obtained in this study provided the possibility of designing acellular vaccines on the basis of important antigens of prevalent strain of B.pertussis in Iran. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
|
|
| نویسندگان مقاله |
بهرام کحالی | b kahali
وجیهه سادات نیکبین | vs nikbin
فرشته شاهچراغی | f shahcheraghi
فایقه کاظمی | f kazemi
مریم رفیع پور | m rafipour
ملیحه کرامتی | m keramati
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://jbums.org/browse.php?a_code=A-10-2716-1&slc_lang=fa&sid=fa |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/95/article-95-448295.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
میکروبیولوژی |
| نوع مقاله منتشر شده |
تحقیقی |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|