مجله دانشگاه علوم پزشکی بابل، جلد ۱۸، شماره ۶، صفحات ۶۶-۷۲
عنوان فارسی همسانه سازی و ساخت وکتور بیانی ژن گلوتامات دکربوکسیلاز باکتری لاکتوباسیلوس پلانتاروم
چکیده فارسی مقاله سابقه و هدف: گاما آمینو بوتیریک اسید (گابا) یک اسیدآمینه چهار کربنه غیر پروتئینی است که در درمان فشارخون، دیابت، التهاب و افسردگی می تواند بکار رود. گابا توسط آنزیم گلوتامیک اسید دکربوکسیلاز در بسیاری از موجودات شامل باکتری‌ها سنتز می شود. از اینرو همسانه سازی این آنزیم جهت بهینه‌سازی تولید گابا اهمیت دارد. هدف از این پژوهش همسانه سازی و ساخت وکتور بیانی حاوی ژن گلوتامات ­دکربوکسیلاز از باکتری لاکتوباسیلوس پلانتاروم PTC1058 است. مواد و روش­ها: در یک مطالعه تجربی خصوصیات مورفولوژیک، بیوشیمیایی، ژنتیکیِ و توالی یابی 16s rDNA سویه لاکتوباسیلوس پلانتاروم1058 بررسی شد. سپس DNA ژنومیک این باکتری جدا و با استفاده از PCR ژن گلوتامات­دکربوکسیلاز تکثر شد. سپس این ژن در حامل کلونینگ pJET1.2/Blunt وارد و در حامل pET32a ساب کلون گردید. حامل پلاسمید بیانی pET32a-gad در اشریشیاکلی سویه BL21 ترانسفورم گردید و بیان پروتئین با استفاده از SDS-PAGE بررسی شد. یافته ­ها: یافته‌های به دست آمده از بررسی‌های مورفولوژیک، بیوشیمیایی و ژنتیکیِ توالی یابی 16s rDNAنشان داد که زیر سویه‌ی مورد بررسی مربوط به سویه لاکتوباسیلوس پلانتاروم است. نتیجه­ی توالی یابی قطعه­ی تکثیرشده با استفاده از PCR وجود ژن گلوتامات دکربوکسیلاز را نشان داد. در پایان نتیجه کلنیPCR و آنالیز SDS-PAGE، صحت همسانه­سازی و بیان آنزیم در سویه­ی نوترکیب BL21را تأیید کرد. نتیجه گیری: این مطالعه همسانه سازی موفق ژن گلوتامات دکربوکسیلاز از لاکتوباسیلوس پلانتاروم1058 را نشان داد. ژن همسانه سازی شده می تواند در سیستم‌های پروکاریوتی و یوکاریوتی سریع رشد و استفاده از محیط کشت‌های ارزان‌تر و حتی پسماند­های غیرقابل بازیافت به کاربرد. 
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Cloning and Expression Vector Construction of Glutamate Decarboxylase Gene from Lactobacillus Plantarum
چکیده انگلیسی مقاله BACKGROUND AND OBJECTIVE: Gamma-aminobutyric acid (GABA) is a four-carbon non-protein amino acid used in the treatment of hypertension, diabetes, inflammation, and depression. GABA is synthesized by glutamic acid decarboxylase (GAD) enzyme in many organisms, including bacteria. Therefore, cloning of this enzyme is essential to the optimization of GABA production. This study aimed to clone and construct the expression vector of GAD gene from Lactobacillus plantarum PTCC 1058 bacterium. METHODS: In this experimental study, we investigated the morphological, biochemical, genetic and 16s rDNA sequencing of L. plantarum PTCC 1058 strain. Genomic DNA of the bacterium was isolated and amplified using the GAD gene via polymerase chain reaction (PCR). Afterwards, the gene was inserted into the pJET1.2/blunt cloning vector and subcloned in vector pET32a. Plasmid pET32a-gad expression vector was transformed in Escherichia coli BL21 strain, and protein expression was assessed using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). FINDINGS: Morphological, biochemical and genetic analyses of 16s rDNA sequencing indicated that the studied substrain was of the L. plantarum strain. In addition, results of nucleotide sequencing of the fragmented segment via PCR showed the presence of GAD gene. Results of colony PCR and SDS-PAGE analysis confirmed the accuracy of the cloning and gene expression of the recombinant Escherichia coli BL21 strain. CONCLUSION: According to the results of this study, cloning of GAD gene from L. plantarum PTCC 1058 was successful. These cloned genes could grow rapidly in prokaryotic and eukaryotic systems and be used in cost-effective culture media and even non-recyclable waste.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله بنت الهدی عربپور | b arabpour


ابوالقاسم اسماعیلی | a esmaeili


محمد ربانی | m rabbani


احمد شیخی | a sheikhi


نشانی اینترنتی http://www.jbums.org/browse.php?a_code=A-10-1091-5&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده ژنتیک، بیولوژی سلولی و مولکولی
نوع مقاله منتشر شده تحقیقی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات