|
|
مجله دانشگاه علوم پزشکی بابل، جلد ۱۵، شماره ۳، صفحات ۷۹-۸۷
|
|
|
| عنوان فارسی |
جداسازی قطعات مناطق متغیر آنتی بادی تک زنجیره ای (scFv) علیه فاکتور نکروز دهنده تومور آلفا (TNF-?) از کتابخانه آنتی بادی فاژی |
|
| چکیده فارسی مقاله |
خلاصهسابقه و هدف: سایتوکاین تراپی، یکی از راهکارهای اصلی برای کنترل بیماری های التهابی شدید است. با توجه به اهمیت TNF-? در بسیاری از بیماری های التهابی و اتو ایمیون، این سایتوکاین یک هدف جذاب برای بسیاری از محققین بوده و بعنوان یکی از کاندیدهای مهم برای سایتوکاین تراپی مطرح است. یکی از راهکارهای مقابله با آثار زیانبار TNF-? استفاده از آنتی بادی های مونوکلونال است. یکی از تکنیک های مهم برای تهیه و تولید آنتی بادی های مونوکلونال تکنیک فاژ دیسپلی می باشد. هدف از این مطالعه تهیه و تولید آنتی بادی مونوکلونال بر ضد TNF-? می باشد.مواد و روشها: بمنظور جداسازی قطعات کوچک نواحی متغیر آنتی بادی (scFv) از کتابخانه فاژی Tomlinson تکنیکBiopanning با استفاده از پلیت های الایزا انجام شد. پس از کوت نمودن پروتئین TNF-? در ته چاهک ها، کتابخانه فاژی اضافه شد. پس از مرحله شستشو، فاژهای اختصاصی با استفاده از تریپسین جدا و در باکتری TG1 تکثیر گردید. این پروسه جهت بدست آوردن فاژهای نوترکیب بسیار اختصاصی تا پنج بار تکرار گردید. ارزیابی کلون های بدست آمده حاوی قطعات کوچک آنتی بادی بر ضد TNF-? با استفاده از تست های مونوکلونال فاژ الایزا،PCR ، RFLP، توالی یابی و وسترن بلات انجام گرفت. یافته ها: تجزیه و تحلیل توالی ها با استفاده از نرم افزار های بیوانفورماتیکی نشان داد که پلاسمیدهای جدا شده از کلون های واکنشگر با TNF-? حاوی اینسرت بودند. بعلاوه تفاوت این توالی ها بیشتر در سه منطقه دا،غ دیده می شود که می تواند در فعالیت پروتئین تاثیر گذارد. نتیجه گیری: نتایج مطالعه نشان داد که با استفاده از تکنیک آنتی بادی فاژ دیسپلی آنتی بادی مونوکلونال نسل چهار بر ضد TNF-? با موفقیت تولید می شود. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
|
|
| عنوان انگلیسی |
Isolation of Anti-Tumor Necrosis Factor-Alpha (TNF-?) scFvs Antibody from Phage Antibody Library |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
ABSTRACTBACKGROUND AND OBJECTIVE: Cytokine therapy is a fundamental step for the control of the most severe inflammatory diseases. Considering the importance of TNF-? in most of autoimmune and inflammatory diseases, it has been as an attractive target for many researchers and is an important candidate for cytokine therapy. Using monoclonal antibodies is a major approach in contrast to deleterious effects of TNF-?. Antibody phage display technology is a major technique for the preparation of monoclonal antibodies. Our goal in current study was production and preparation of monoclonal antibody against TNF-?.METHODS: For Biopanning technique, we used ELISA plates for isolation of single chain variable fragments (scFv) from Tomlinson library. After coating of TNF-? protein in the wells, phage library was added. Specific phages were eluted using Trypsin after washing process and amplified in TG1 cells. Five rounds of panning were conducted for obtaining high specific phages. The evaluation of selected clones was done through monoclonal phage ELISA, PCR, RFLP and western blotting methods. FINDINGS: Analysis of sequences using bioinformatic softwares showed that separated plasmids from TNF-? reactive clones contained insertions. Furthermore, most of variations are seen in three hot regions which can affect protein function.CONCLUSION: The results of this study showed that forth generation of monoclonal antibodies against human TNF-? were successfully produced. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
|
|
| نویسندگان مقاله |
جلال عبدالعلی زادهphd | j abdolalizadeh
آدرس تبریز، دانشگاه علوم پزشکی، مرکز تحقیقات ریزفن آوری دارویی، تلفن 3364665-0411 e-mail jmajidiz@yahoo.com
جعفر مجیدی ذوالبنینphd | j majidi zolbanin
محمد نوری p hd | m nouri
بهزاد برادرانphd | b baradaran
ابوالفضل برزگری m sc | a barzegari
یداله امیدی p hd | y omidi
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://www.jbums.org/browse.php?a_code=A-10-1370-888&slc_lang=fa&sid=fa |
| فایل مقاله |
فایلی برای مقاله ذخیره نشده است |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
بیوشیمی |
| نوع مقاله منتشر شده |
تحلیلی |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|